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用于分析的鞘脂的分离

由于各种脂质种类之间的物理特性范围很广,因此很难用一种技术分离所有脂质。 通常使用不同的方法来提取极性和非极性化合物。 一些方法允许分离所有脂质种类,但不一定像更专业的协议那样定量。 许多参考文献可供选择,具体取决于研究人员的要求。 提供了两个非常有用的在线资源,可以帮助您熟悉各种协议 AOCS Lipid Library Cyberlipid 。

最常见的脂质提取技术是 Folch 和 Bligh 和 Dyer 方法,概述如下:

福尔奇方法:

  1. 用氯仿/甲醇 2:1、20 毫升/克组织匀浆组织样本。

  2. 通过过滤或离心除去固体。

  3. 添加 0.2 体积的 0.9% KCl 或 NaCl。

  4. 轻轻混合并让各层分离。  离心将加速分离。

  5. 神经节苷脂主要存在于水相中。

    • 神经节苷脂可以通过反相色谱法回收。

  6. 几乎所有其他脂质都在有机溶剂层中。

  7. 通过正相色谱法浓缩和纯化。


Bligh 和 Dyer 方法:

  1. 用 1 ml 水或 1M NaCl 或 1M KCl 将组织样本均质化。

  2. 加入 3.75 ml 氯仿/甲醇 1:2 并匀浆。

  3. 加入 1.25 ml 氯仿并混合。

  4. 加入 1.25 毫升水并混合。

  5. 离心分离水相和有机相。

  6. 神经节苷脂主要存在于水相中。

    • 神经节苷脂可以通过反相色谱法回收。

  7. 几乎所有其他脂质都在有机溶剂层中。

  8. 通过正相色谱法浓缩和纯化。


分析性鞘脂提取和分析参考资料:

  1. 葡萄糖基鞘氨醇: 鞘氨醇: M. Fuller 等人,从血浆中快速单相提取葡萄糖基 一种通用的筛查和监测工具。 临床。 哼。 学报。 460, 6-10 (2015) doi: 10.1016/j.cca.2015.07.026

  2. 硫脂 M. Barcenas 等人,通过液相色谱/电喷雾串联质谱法定量分析异染性脑白质营养不良患者的干血和尿斑中的硫脂。 临床。 哼。 学报。 433, 39-43 (2014) doi: 10.1016/j.cca.2013.12.016

  3. 神经节苷脂:

    1. E. Masson 等人,了解神经节苷脂多样性:综合方法论。  J. 脂质水库。  56(9), 1821-1835 (2015) doi: 10.1194/jlr.D060764

    2. Z. Yangyang 等,ESI 和 MALDI 质谱的组合用于脑中神经节苷脂的定性、半定量和原位分析。  科学。  Rep. 6, 25289 (2016) doi: 10.1038/srep25289

    3. M. Tropak 等人,能够形成稳定的同型二聚体的杂交 β-氨基己糖苷酶亚基的构建,该二聚体可在体内水解 GM2 神经节苷脂。  摩尔。  那个。  方法临床。  开发。  3、15057 (2016) doi: 10.1038/mtm.2015.57


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