用于分析的鞘脂的分离
由于各种脂质种类之间的物理特性范围很广,因此很难用一种技术分离所有脂质。 通常使用不同的方法来提取极性和非极性化合物。 一些方法允许分离所有脂质种类,但不一定像更专业的协议那样定量。 许多参考文献可供选择,具体取决于研究人员的要求。 提供了两个非常有用的在线资源,可以帮助您熟悉各种协议 AOCS Lipid Library 和 Cyberlipid 。
最常见的脂质提取技术是 Folch 和 Bligh 和 Dyer 方法,概述如下:
福尔奇方法:
用氯仿/甲醇 2:1、20 毫升/克组织匀浆组织样本。
通过过滤或离心除去固体。
添加 0.2 体积的 0.9% KCl 或 NaCl。
轻轻混合并让各层分离。 离心将加速分离。
神经节苷脂主要存在于水相中。
神经节苷脂可以通过反相色谱法回收。
几乎所有其他脂质都在有机溶剂层中。
通过正相色谱法浓缩和纯化。
Bligh 和 Dyer 方法:
用 1 ml 水或 1M NaCl 或 1M KCl 将组织样本均质化。
加入 3.75 ml 氯仿/甲醇 1:2 并匀浆。
加入 1.25 ml 氯仿并混合。
加入 1.25 毫升水并混合。
离心分离水相和有机相。
神经节苷脂主要存在于水相中。
神经节苷脂可以通过反相色谱法回收。
几乎所有其他脂质都在有机溶剂层中。
通过正相色谱法浓缩和纯化。
分析性鞘脂提取和分析参考资料:
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